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转基因鼠(转基因小鼠)
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产品: 浏览次数:736转基因鼠(转基因小鼠) 
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最后更新: 2009-11-23 15:34
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详细信息
一般认为转基因动物是指那些在其基因组中整合有用实验的方法导入的外源基因,且又能稳定遗传给后代的一类动物。不同国家和地区的科学家对这一术语的理解和定义不尽相同,但其基本的含义是一致的。长期以来生物学家希望能克服种间不育的障碍,以实现不同物种间遗传物质的交换,从而有可能培养出动物的新品种;但由于受到传统技术条件的限制,这一难题始终未能得到解决。直到70年代末,随着DNA重组技术的问世和胚胎体外操作技术的进步,使人类有能力用实验的方法进行外源基因的转移,从而使人们能有目的、有计划和有预见地改变动物遗传物质的组成。转基因动物的培育成功,表明不同动物间遗传物质的转移得以实现。这一崭新技术的成功应用,标志着现代生物科学的巨大进步,它对农、牧、渔、医各个学科领域的发展都有重大影响。 基本步骤: 1目的基因(基因组基因或cDNA)的克隆,表达载体的构建; 2受精卵的收集; 3外源基因的导入,胚胎的移植和对出生后代的鉴定,分析,繁殖和选育。 我们通过慢病毒制备的转基因鼠,效率高,时间快,能做各种基因过表达(over express),降低表达(knock down)的研究及诱导型表达(duug induced)的转基因鼠。 相关资料:基因的移植是制作转基因动物的关键技术, 外源基因导入受精卵大体可分为三种方法:即物理方法,化学方法和生物方法。这三种方法各有优缺点,可根据不同研究的需要选择合适的方法。 (1),物理方法:主要包括显微注射法,电激法,超声波法,冻融法,基因枪法等;其中以显微注射法用的最普遍,多数转基因动物使通过该法获得的。显微注射法的优点是可导入大片断(大于50Kb)的外源基因;外源基因的整合率较高;外源基因几乎分布于所有组织细胞中。其局限性在于要求仪器精密,造价高,需作特殊处理才能有效地将外源基因导入,显然微注射法很难用于鸟类受精卵的外源基因的导入。基因枪法和电穿孔法主要用于植物的基因转移。 (2),化学方法:磷酸钙沉淀法,多聚阳离子试剂法,脂质体包埋,和DEAE-葡聚糖法等均属于化学方法。目前,脂质体介导是最佳的选择。脂质体种类较多,多数为阳离子脂质体。首先将磷脂、胆固醇或其他脂类的乙醚溶液加到DNA溶液中,加温蒸发得到单层或双层带有DNA的脂质体小泡;DNA包裹在脂质体膜内,可以与细胞融合,被细胞内吞,从而完成细胞的导入。该法效率很高,100%的离体细胞可以瞬时表达外源基因。磷酸钙沉淀法是利用化学反应将外源基因包在形成的沉淀微粒中,然后被受体细胞所吞食而导入。此法材料易得,方法简便,为许多实验室采用。 (3),生物学方法:生物学方法主要包括反转录病毒法,精子载体法,原生质介导法,细胞融合法,ES细胞法及人工染色质法。原则上反转录病毒法可插入各种基因组DNA或cDNA,但其容量较小,在10Kb以下。该方法的优点是感染率高,宿主范围广,整合率高,尤其是在医疗界广泛用于基因治疗,目前在鸟类转基因研究中常用此法。精子载体法是将精子与DNA孵化,使DNA吸附在精质膜上,也有DNA进入精子头部质膜内侧;然后通过授精将外源基因导入。此法特异性强,操作简便。尽管在学术界对精子载体法尚存在争议,但用该方法已成功地培育出转基因鱼,转基因鸡等。ES细胞法是将外源基因直接导入ES细胞,经体外培养筛选后,注入表胚,再移植入受体子宫内,发育为嵌和体转基因动物。该方法可在细胞移植前对其进行鉴定和筛选,有利于培育转基因动物纯合系;但ES细胞的分离合培养并不容易,目前只有小鼠的ES细胞培养成功,因此该方法的应用尚有待于发展和完善。对于超过100Kb的外源基因就需要人工染色质法(YAC)作为载体。这种载体携带外源基因的容量大,高达500Kb -600Kb;可以满足几乎所有单个基因组基因的需要。存在于YAC中的外源基因可不整合到细胞基因组中,从理论上可以在细胞中稳定存在;但YAC如何不为宿主细胞所丢失以及细胞分裂时携带有外源基因的YAC如何正确分配等,尚需在理论和实践中对YAC载体法进行研究和讨论。把携带有外源基因的受精卵移植到受体动物后,不能保障出生的幼小动物就是转基因动物吗,只有通过鉴定才能确认是否得到转基因动物。对动物的鉴定通常采用的是不同层次的分子杂交法;如基因水平的DNA印迹法(Southern blot),转录水平的RNA印迹法(Northern blot),翻译水平的蛋白印迹法(Western blot),也可采用基因定位法(Gene Location)。1996年由“863”办公室主持召开了“转基因动、植物学术研讨会”,会上确定了转基因的标准。这些标准包括:要有严格的对照;能提供转化后当代(RO)可靠的分子生物学证据;应具有目的基因控制的表现性状;所携带的外源基因能稳定遗传后代。用这些标准可以衡量转基因动物研究发展情况。
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